Определение группы крови человека. Способы определения группы крови. Метод перекрестной реакции

Каждый человек - носитель генетически наследуемых характеристик, неизменных при естественных условиях, или определенного типа крови. Группа крови - отличительный признак белков, углеводов, гликопротеинов, гликолипидов, формирующихся на поверхности эритроцитов и носящих название «антиген». Составляя часть мембраны красных форменных элементов, антигены обнаруживают себя у всех представителей рода человеческого.

В медицине классифицируют множество разновидностей эритроцитарных групповых антигенов, то есть разные люди могут обладать одинаковым антигенным набором. Исходя из типологии антигенов, различают около трех десятков систем групп крови, таких как АВ0, MNS, Lutheran, Rh, Duffy, Colton и др.

Современная медицина пользуется двумя - АВ0 и Rh, играющими решающую роль при трансфузии. Подробнее рассмотрим в данной статье обозначенные системы группы крови «а-бэ-ноль» и «резус-фактор».

Система группы крови AB0

Открытию группы крови по системе АВ0 мы обязаны австрийскому иммунологу Карлу Ландштейнеру. Именно он сделал вывод, что одинаковая с виду кровь различается эритроцитарными свойствами. Жидкую подвижную соединительную ткань он распределил на три группы, обозначив их как A, B, 0. Позднее чешский врач Я. Янский открыл дополнительную группу AB и предложил обозначать типы крови с помощью цифр I, II, III, IV.

С этих пор трансфузия (переливание) считается эффективным терапевтическим методом, активно используемым при лечении многих болезней.

С 1928 году гигиенической Лигой Наций утверждено еще буквенное обозначение, по сей день принятое за основу классификации во всем мире: 0 (I), A (II), B (III), AB (IV).

Группы крови системы АВ0 позволили определить, почему переливание часто проходит с успехом, однако порой имеет летальный исход. Ландштейнер опытным путем доказал: при смешении эритроцитов одного пациента с плазмой другого, кровь свертывается, образуя хлопья. Эта способность плазмы (сыворотки) склеивать (агглютинировать) красные кровяные клетки получила название изогемагглютинация. Происходит эта реакция из-за присутствия в красных форменных элементах антигенов, именуемых агглютиногенами, которые обозначаются буквами A, B; а в сыворотке - природных антител (агглютининов), обозначаемых как a, b. Изогемагглютинация происходит только тогда, когда встречаются однобуквенные антигены и антитела, например, A-a, B-b.

Соответственно, в человеческой крови невозможно соединение одноименных агглютиногенов и агглютининов, поскольку способность агглютинировать эритроциты приведет к смерти.

Согласно теории Ландштейнера допускаются только четыре сочетания, исключающие встречу однобуквенных антигенов и антител, или 4 разновидности крови. Основанием данного разделения считается способность жидкой подвижной соединительной ткани содержать/не содержать антигены (агглютиногены) А, В и антитела (агглютинины) a (альфа или анти-А), b (бета или анти-Б).

Данная таблица отражает серологию по системе АВ0 группы крови:

Как видно из таблицы, в плазме имеются два вида гемолизинов, обозначаемых также буквами a, b. Соединение однобуквенных агглютиногенов и гемолизинов приводит к гемолизу (разрушению) эритроцитов. Данная реакция совершается при температуре 37-40°С, в то время при комнатном температурном режиме встреча одноименных антигенов и антител сопровождается агглютинацией без гемолиза.

Плазма обладателей II, III, IV типов содержит антиагглютиногены, оставившие красные кровяные тельца и ткани, отмечающиеся как агглютиногены – А, В.

Благодаря данной теории стала возможна трансфузия, протекающая без различного рода осложнений.

Существует общепринятое правило определения совместимости крови разных типов: плазма реципиента обязана принять донорские эритроциты. Поэтому у пациента, нуждающегося в переливании, важно учитывать значение агглютининов и гемолизинов, в то время как у отдающего кровь - агглютиногенов, присутствующих в красных форменных элементах.

Решая проблему сочетаемости группы крови по АВ0, необходимо смешать жидкую соединительную ткань с сывороткой, взятой у носителей разных типов крови. Агглютинация наблюдается при следующих сочетаниях:

Из этого следует, что по системе AB0 I группе свойственно абсолютное сочетание с остальными, ее носители признаны универсальными донорами. Соответственно, обладатели IV группы являются универсальными реципиентами, так как красные кровяные клетки данного типа не должны вызывать агглютинацию с плазмой носителей другого типа крови.

Поскольку при таком подходе могут возникнуть осложнения, в медицинской среде чаще всего пользуются другим методом: реципиенту переливается одногруппный материал донора при множественной кровопотере. Редко используют выше описанное правило смешивания групп.

Rh-система крови

Значимой системой крови после AB0 считается Rh (резус-фактор), открытая в 40-ые годы 20-го столетия К. Ландштейнером и К. Винером. Она представляет собой 50 антигенов, обнаруживаемых группой крови. Самыми важными признаны 6 (D, C, c, CW, E, e). Наиболее активным является D-антиген, определяющий принадлежность людей к резус-положительному (Rh+)/резус-отрицательному (Rh–) фактору. Наличие антигена говорит о Rh+ у 85% людей белой расы. У остальных 15% антиген (агглютинин) отсутствует, что свидетельствует о Rh–. В сравнении с системой AB0 у Rh отсутствуют необходимые агглютинины в плазме. Но при трансфузии материала Rh+ донора Rh– реципиенту обнаруживаются антитела - антирезус - агглютинины в крови испытуемого, которому переливали донорскую кровь. Повторение процедуры приводит к агглютинации эритроцитов, или гемотрансфузионному шоку.

Ученые пришли к выводу, что носителям Rh– можно переливать только Rh–.

Аналогичная ситуация может возникнуть у матери - обладательницы Rh– при вынашивании ребенка — носителя Rh+, когда резус-агглютиногены, оказываясь в ее организме, активно вырабатывают антитела. Как правило, первая беременность протекает успешно и заканчивается благополучным родоразрешением. По статистике при последующих вынашиваниях Rh+ плода антитела, проникая через плаценту, поражают красные кровяные клетки плода, приводя к выкидышу или гемолитической анемии новорожденных. Поэтому в качестве иммунопрофилактических мер женщинам с Rh– после первых родов вводят концентрат анти-D-антитела.

Тестирование на группу крови и резус-фактор

Знание группы крови, резус-фактора очень важно для спасения жизни в ситуациях, чаще всего связанных с большой кровопотерей или других патологических случаях, когда трансфузия является одним из основных терапевтических методов.

Результаты исследования покажут принадлежность крови человека к одной из групп системы «а-бэ-ноль», исходя из наличия антигенов на красных кровяных тельцах и антител.

Определение принадлежности к группе крови по системе АВ0 происходит по активным стандартным плазмам каждой из групп с титром 1:32 и красным форменным элементам, соответствующим стандарту. Иногда дополнительно используют плазму IV группы. Данные материалы смешивают с кровью пациента, затем следят за реакцией в течение 3 мин. К смеси плазмы с кровью с наступившим склеиванием капают 0,9% раствор хлорида натрия и ждут до 5 минут. Затем считывают агглютинацию через проходящий свет, на основании чего делают вывод о групповой принадлежности:

• отсутствие агглютинации во всех пробах отрицает агглютиноген, говоря об отношении к 0(I);
• агглютинация в плазме с пробами 0(I), В(III) указывает на агглютиноген А и А(II);
• наличие процесса склеивания красных форменных элементов в сыворотке 0(I), А(II) говорит о присутствии агглютиногена В и отношении к В(III);
• протекание агглютинации во всех исследуемых материалах показывает присутствие агглютиногенов А, В и принадлежность к АВ(IV).

В последнем случае возможна неспецифическая реакция. Для подтверждения данных смешивают стандартную сыворотку АВ(IV), кровь испытуемого и ведут наблюдение в течение 5 мин. Если склеивание эритроцитов не происходит, она имеет отношение к группе АВ(IV).

При слабо выраженной агглютинации или в случае сомнения пробу повторяют вновь.

Для тестирования резус-фактора применяют стандартный реагент с антителами к резус-антигенам, смешивая его с кровью испытуемого. После добавления через 3-5 минут физраствора перемешивают содержимое и визуально на проходящий свет определяют наличие склеивания эритроцитов и выпадения осадка. При обнаружении хлопьев красного цвета делают вывод об отношении к Rh+. Отсутствие агглютинации свидетельствует о Rh–.

Группа крови по системе АВ0 и Rh принято указывать на одной строке, например, 0 (I)Rh+, 0 (I)Rh- и т.д.

Сдать анализ крови на групповую принадлежность и резус-фактор можно в любой клинической лаборатории. Кроме этих значений в анализе указывают совместимость, определяя материал какой группы, резус-фактора можно переливать при острой необходимости.

Наследование групп крови

Доказано, что группа крови ребенка наследуется от родителей. Существует несколько очевидных закономерностей в наследовании групповой принадлежности:

1. В семье, где один из родителей имеет 0(I), не может родиться малыш с IV(AB) группой. При этом группа второго родителя не имеет значения.
2. Мама и папа - носители 1 группы крови, значит дети родятся с аналогичной группой.
3. У родителей со 2 группой рождаются младенцы только с 1 или 2 группами.
4. Если оба супруга имеют 3 группу, то дети - носители только 1 или 3.
5. При наличии у одного из родителей типа IV(AB) не может родиться ребенок с 1 группой независимо от группы крови другого родителя.
6. При сочетании 2 и 3 групп у супругов дети могут иметь любой из возможных типов крови.

Зафиксировано, что в 1 случае на десять миллионов может произойти наследственная мутация, именуемая бомбейский феномен. Его суть в том, что дети при рождении имеют группу, которая не содержит антигены А и B, а также компонент Н. Такие люди живут обычной жизнью, сложности могут возникнуть лишь при трансфузии или установлении отцовства.

Знать свою группу крови, резус-фактор, а также совместимость с другими группами должен каждый человек. Иногда это становится решающим фактором, от которого зависит жизнь.

Вконтакте

ОБЩИЕ ПОЛОЖЕНИЯ

Систему группы крови АВО составляют два групповых агглютиногена - А и В и два соответствующих агглютинина в плазме - альфа (анти-А) и бета (анти-В). Различные сочетания этих антигенов и антител образуют четыре группы крови: группа 0(1) - оба антигена отсутствуют; группа А(II) - на эритроцитах присутствует только антиген А; группа В(III) - на эритроцитах присутствует только антиген В; группа АВ (IV) - на эритроцитах присутствуют антигены А и В.

Уникальность системы АВО состоит в том, что в плазме у неиммунизированных людей имеются естественные антитела к отсутствующему на эритроцитах антигену: у лиц группы 0(1) - антитела к А и В; у лиц группы А(II) - анти-В-антитела; у лиц группы В(III) - анти-А-антитела; у лиц группы АВ(IV) нет антител к антигенам системы АВО.

В последующем тексте анти-А- и анти-В-антитела будут обозначаться как анти-А и анти-В.

Определение группы крови АВО проводят путем идентификации специфических антигенов и антител (двойная или перекрестная реакция). Анти-А и анти-В выявляют в сыворотке крови с помощью стандартных эритроцитов А(II) и В(III). Наличие или отсутствие на эритроцитах антигенов А и В устанавливают при помощи моноклональных или поликлональных антител (стандартных гемагглютинирующих сывороток) соответствующей специфичности.

Определение группы крови проводят дважды: первичное исследование - в лечебном отделении (бригаде заготовки крови); подтверждающее исследование - в лабораторном отделении. Алгоритм проведения иммуногематологических лабораторных исследований при переливании крови представлен на рис. 18.1.

Результат определения группы крови записывается в правом верхнем углу лицевого листа истории болезни или в донорский журнал (карту)с указанием даты и за подписью врача, производившего определение.

На северо-западе России распределение групп крови системы АВО в популяции следующее: группа 0(I) - 35%; группа А(II) - 35-40%; группа В(III) - 15-20%; группа АВ (IV) - 5-10%.

Следует отметить, что существуют различные виды (слабые варианты) как антигена А (в большей степени), так и антигена В. Наиболее часто встречаются виды антигена А - А 1 и А 2 . Распространенность антигена А 1 у лиц групп А(II) и АВ(IV) составляет 80%, а антигена А 2 - около 20%. Образцы крови с А 2 могут содержать анти-А 1 -антитела , взаимодействующие со стандартными эритроцитами группы А(II). Наличие анти-А 1 выявляется при перекрестном определении групп крови и при проведении пробы на индивидуальную совместимость.

Для дифференцированного определения вариантов антигена А (А 1 и А 2) необходимо использовать специфические реагенты (фитогемагглютинины или моноклональные антитела анти-А 1 . Пациентам групп А 2 (II) и А 2 В(IV) нужно переливать эритроцитосодержащие гемокомпоненты, соответственно, групп А 2 (II) и А 2 В(IV). Также могут быть рекомендованы трансфузии отмытых эритроцитов: 0(I) - пациентам с группой крови А 2 (II); 0(I) и В(III) - пациентам с группой крови А 2 В(II).

Определение групповой принадлежности крови по системе АВО

Группы крови определяют по стандартным сывороткам (простая реакция) и стандартным эритроцитам (двойная или перекрестная реакция).

Группу крови простой реакцией определяют обязательно двумя сериями стандартных изогемагглютинирующих сывороток.

• Ход определения [показать] .

  Определение группы крови производят при хорошем освещении и температуре от + 15 до + 25°С на планшетах. На левой стороне планшета надписывают 0(1), в середине - А(II), на правой стороне - В(III). В середине верхнего края планшета отмечают фамилию донора или номер исследуемой крови. Используют активные стандартные сыворотки трех групп (О, А, В) с титром не ниже 1:32, двух серий. Сыворотки располагают в специальных штативах в два ряда. Каждой сыворотке соответствует маркированная пипетка. Для дополнительного контроля используют сыворотку группы АВ(IV).

  На планшет наносят по одной - две капли стандартных сывороток в два ряда: сыворотку группы 0(1) - слева, сыворотку группы А(II) - в середину, сыворотку группы В(III) - справа.

  Капли крови из пальца или пробирки наносят пипеткой или стеклянной палочкой около каждой капли сыворотки и смешивают палочкой. Количество крови должно быть в 8-10 раз меньше, чем сыворотки. После смешивания тарелку или планшет осторожно покачивают в руках, что способствует более быстрой и четкой агглютинации эритроцитов. По мере наступления агглютинации, но не ранее чем через 3 мин, к каплям сыворотки с эритроцитами, где наступила агглютинация, добавляют по одной капле 0,9% раствора хлорида натрия и продолжают наблюдение до истечения 5 мин. Через 5 мин читают реакцию в проходящем свете.

  Если агглютинация нечеткая, к смеси сыворотки и крови дополнительно добавляют по одной капле 0,9% раствора хлорида натрия, после чего дают заключение о групповой принадлежности (табл. 18.4).

• Результаты реакции [показать] .
  1. Отсутствие агглютинации во всех трех каплях указывает на то, что в исследуемой крови нет агглютиногена, то есть кровь относится к группе 0(I).
  2. Наступление агглютинации в каплях с сыворотками 0(I) и В(III) указывает на то, что в крови имеется аггглютиноген А, то есть кровь относится к группе А(II).
  3. Наличие агглютинации в каплях с сыворотками группы 0(I) и А(II) указывает на то, что в исследуемой крови имеется агглютиноген В, то есть кровь группы В(III).
  4. Агглютинация во всех трех каплях указывает на наличие в исследуемой крови агглютиногенов А и В, то есть кровь относится к группе АВ(IV). Однако в этом случае, учитывая, что агглютинация со всеми сыворотками возможна за счет неспецифической реакции, необходимо нанести на планшет или тарелку две-три капли стандартной сыворотки группы АВ(IV) и добавить к ним 1 каплю исследуемой крови. Сыворотку и кровь перемешивают и результат реакции наблюдают в течение 5 мин.

     Если агглютинация не наступила, то исследуемую кровь относят к группе АВ(IV). Если же агглютинация появляется с сывороткой группы АВ(IV), значит, реакция неспецифическая. При слабой агглютинации и во всех сомнительных случаях кровь заново проверяют со стандартными сыворотками других серий.

Определение группы крови АВО двойной реакцией
(по стандартным сывороткам и стандартным эритроцитам)

Стандартные эритроциты представляют собой 10-20% взвесь свежих нативных эритроцитов (или отмытых от консерванта тест-клеток) группы 0(I), А(II) и В(III) в 0,9% растворе хлорида натрия или цитратно-солевом растворе. Нативные стандартные эритроциты могут быть использованы в течение 2-3 дней при условии хранения их в изотоническом солевом растворе при температуре +4°С. Консервированные стандартные эритроциты хранят при температуре +4°С в течение 2-х месяцев и отмывают от консервирующего раствора перед использованием.

Ампулы или флаконы со стандартными сыворотками и стандартными эритроцитами располагают в специальных штативах с соответствующей маркировкой. Для работы с типирующими реагентами используют сухие чистые пипетки, отдельные для каждого реагента. Для промывания стеклянных (пластмассовых) палочек и пипеток подготавливают стаканы с 0,9% раствором хлорида натрия.

Для определения группы берут 3-5 мл крови в пробирку без стабилизатора. Кровь должна отстояться в течение 1,5-2 ч при температуре + 15-25° С.

• Ход определения [показать] .

  На планшет наносят по две капли (0,1 мл) стандартных сывороток групп 0(I), А(II), В(III) двух серий. Соответственно каждой группе сывороток располагают по одной маленькой капле (0,01 мл) стандартных эритроцитов групп 0(I), А(II), В(III). В стандартные сыворотки добавляют по одной капле исследуемой крови, а в стандартные эритроциты - по две капли исследуемой сыворотки. Количество крови должно быть в 8-10 раз меньше, чем сыворотки. Капли перемешивают стеклянной палочкой и, покачивая планшет в руках в течение 5 мин, следят за наступлением агглютинации. Если агглютинация нечеткая, к смеси сыворотки и крови дополнительно добавляют по одной капле 0,9% раствора хлорида натрия (0,1 мл), после чего делают заключение о групповой принадлежности (табл. 18.4).

• Оценка результатов определения группы крови системы АВО [показать] .
  1. Наличие агглютинации со стандартными эритроцитами А и В и отсутствие агглютинации в трех стандартных сыворотках двух серий указывает на то, что в исследуемой сыворотке присутствуют оба агглютинина - альфа и бета, а в исследуемых эритроцитах нет агглютиногенов, то есть кровь относится к группе 0(I).
  2. Наличие агглютинации со стандартными сыворотками групп 0(I), В(III) и со стандартными эритроцитами группы В(III) указывает на то, что в исследуемых эритроцитах имеется агглютиноген А, а в исследуемой сыворотке - агглютинин бета. Следовательно, кровь относится к группе А(II).
  3. Наличие агглютинации со стандартными сыворотками групп 0(I), А(II) и со стандартными эритроцитами группы А(II) указывает на то, что в исследуемых эритроцитах имеется агглютиноген В, а в исследуемой сыворотке - агглютинин альфа. Следовательно кровь относится к группе В(III).
  4. Наличие агглютинации со всеми стандартными сыворотками и отсутствие агглютинации со всеми стандартными эритроцитами указывает на то, что в исследуемых эритроцитах имеются оба агглютинина, то есть кровь относится к группе АВ(IV).

Определение групповой принадлежности крови
с использованием цоликлонов анти-А и анти-В

Цоликлоны анти-А и анти-В (моноклональные антитела к антигенам А и В) предназначены для определения группы крови системы АВО человека взамен стандартных изогемагглютинирующих сывороток. Для каждого определения группы крови применяют по одной серии реагента анти-А и анти-В.

• Ход определения [показать] .

  На планшет (пластинку) наносят по одной большой капле цоликлонов анти-А и анти-В (0,1 мл) под соответствующими надписями: "Анти-А" или "Анти-В". Рядом помещают по одной маленькой капле исследуемой крови (соотношение кровыреагент - 1:10), затем реагент и кровь смешивают и наблюдают за ходом реакции при легком покачивании планшета или пластинки.

  Агглютинация с цоликлонами анти-А и анти-В обычно наступает в первые 5-10 с. Наблюдение следует вести 2,5 мин, ввиду возможности более позднего наступления агглютинации с эритроцитами, содержащими слабые разновидности антигенов А или В.

• Оценка результатов реакции агглютинации с цоликлонами анти-А и анти-В представлена в табл. 18.4, в которую также включены результаты определения агглютининов в сыворотке доноров с помощью стандартных эритроцитов.

При подозрении на спонтанную агглютинацию у лиц с группой крови АВ(IV) проводят контрольное исследование с 0,9% раствором хлорида натрия. Реакция должна быть отрицательной.

Цоликлоны анти-А (розового цвета) и анти-В (синего цвета) выпускаются как в нативной, так и лиофилизированной форме в ампулах по 20, 50, 100 и 200 доз с растворителем, приложенным к каждой ампуле, по 2, 5, 10, 20 мл соответственно.

Дополнительным контролем правильности определения группы крови АВО реагентами анти-А и анти-В является моноклональный реагент анти-АВ ("Гематолог", Москва). Реагент анти-АВ целесообразно использовать параллельно как с иммунными поликлональными сыворотками, так и с моноклональными реагентами. В результате реакции с реагентом анти-АВ развивается агглютинация эритроцитов групп А(II), В(III) и АВ(IV); у эритроцитов группы 0(I) агглютинация отсутствует.

ОШИБКИ ПРИ ОПРЕДЕЛЕНИИ ГРУППОВОЙ ПРИНАДЛЕЖНОСТИ

Ошибки при определении групп крови могут зависеть от трех причин:

1. технических;
2. неполноценности стандартных сывороток и стандартных эритроцитов;
3. биологических особенностей исследуемой крови.

К ошибкам по техническим причинам относятся:

• а) неправильное расположение сывороток на планшете;
• б) неправильные количественные соотношения сывороток и эритроцитов;
• в) применение недостаточно чистых планшетов и других предметов, соприкасающихся с кровью. Для каждой сыворотки должна быть отдельная пипетка; для промывания пипеток следует применять только 0,9% раствор хлорида натрия;
• г) неправильная запись исследуемой крови;
• д) несоблюдение положенного для реакции агглютинации времени; при поспешности, когда реакцию учитывают до истечения 5 мин, агглютинация может не наступить, если в исследуемой крови имеются слабые агглютиногены; при передержанной более 5 мин реакции может произойти подсыхание капель с краев, симулирующее агглютинацию, что также поведет к ошибочному заключению;
• е) отсутствие агглютинации из-за высокой (выше 25°С) температуры окружающего воздуха. Во избежание этой ошибки целесообразно использовать специально приготовленные сыворотки для работы в условиях жаркого климата; производить определение групп крови на тарелке или пластмассовом подносе, внешняя поверхность дна которых опущена в холодную воду.
• ж) неправильное центрифугирование: недостаточное может привести к ложноотрицательному результату, а избыточное - к ложноположительному.

Ошибки, зависящие от применения неполноценных стандартных сывороток и стандартных эритроцитов:

• а) слабые стандартные сыворотки с титром ниже чем 1:32 или с истекшим сроком годности могут вызывать позднюю и слабую агглютинацию;
• б) применение негодных стандартных сывороток или эритроцитов, которые были приготовлены нестерильно и недостаточно законсервированы, ведет к возникновению неспецифической "бактериальной" агглютинации.

Ошибки, зависящие от биологических особенностей исследуемой крови:

Ошибки, зависящие от биологических особенностей исследуемых эритроцитов:

• а) поздняя и слабая агглютинация объясняется "слабыми" формами антигенов, эритроцитов, чаще - наличием в группах А и АВ слабого агглютиногена А 2 . При этом, в случае определения группы крови без исследования сыворотки на наличие агглютининов (простая реакция) могут наблюдаться ошибки, вследствие которых кровь группы А 2 В определяют как группу В(III), а кровь А 2 - как группу 0(I). Поэтому, во избежание ошибок, определение группы крови как доноров, так и реципиентов необходимо проводить с использованием стандартных эритроцитов (двойная или перекрестная реакция). Для идентификации агглютиногена А 2 рекомендуется повторить исследование с другими видами (сериями) реагентов, используя другую лабораторную посуду, с увеличением времени регистрации реакции.

  Специфическими реагентами уточнения группы крови при наличии слабых вариантов антигена А (А 1 , А 2 , А 3) методом прямой реакции агглютинации являются цоликлон анти-А сл и реагент анти-А).

• б) "панагглютинация" или "аутоагглютинация", то есть способность крови давать одинаковую неспецифическую агглютинацию со всеми сыворотками и даже со своей собственной. Интенсивность подобной реакции после 5 мин ослабевает, в то время как истинная агглютинация усиливается. Наиболее часто встречается у гематологических, онкологических больных, обожженных и др. Для контроля рекомендуется оценить, происходит ли агглютинация тестируемых эритроцитов в стандартной сыворотке группы АВ (IV) и физиологическом растворе.

  Группа крови при "панагглютинации" может быть определена после трехкратного отмывания эритроцитов. Для устранения неспецифической агглютинации планшет помещают в термостат при температуре +37°С на 5 мин, после чего неспецифическая агглютинация исчезает, а истинная остается. Целесообразно повторить определение с использованием моноклональных антител, постановки пробы Кумбса.

  В том случае, когда отмывание эритроцитов не дает желаемого результата, необходимо произвести повторное взятие образца крови в предварительно согретую пробирку, поместить пробу в термоконтейнер для поддержания температуры +37°С и доставить в лабораторию на исследование. Определение группы крови необходимо производить при температуре +37°С, для чего используют предварительно подогретые реактивы, физиологический раствор и планшет.

• в) эритроциты тестируемой крови складываются в "монетные столбики", которые при макроскопии можно принять за агглютинаты. Прибавление 1-2 капель изотонического раствора хлорида натрия с последующим мягким покачиванием планшета, как правило, уничтожает "монетные столбики".
• г) смешанная или неполная агглютинация: часть эритроцитов агглютинирует, а часть остается свободной. Наблюдается у пациентов групп А(II), В(III) и АВ(IV) после трансплантации костного мозга или в течение первых трех месяцев после переливания крови группы 0(I). Разнородность эритроцитов периферической крови четко верифицируется в гелевом тесте DiaMed.

Ошибки, зависящие от биологических особенностей исследуемой сыворотки:

• а) выявление антител другой специфичности при рутинном тестировании является результатом предшествующей сенсибилизации. Целесообразно определить специфичность антител и подобрать типированные эритроциты без антигена, к которому выявлена иммунизация. Иммунизированному реципиенту обязателен индивидуальный подбор совместимой донорской крови;
• б) при выявлении образования "монетных столбиков" стандартных эритроцитов в присутствии тестируемой сыворотки аномальный результат целесообразно подвердить, используя стандартные эритроциты группы 0(I). Для дифференцировки "монетных столбиков" и истинных агглютинатов добавляют 1-2 капли изотонического раствора хлорида натрия и покачивают планшет, при этом "монетные столбики" разрушаются;
• в) отсутствие анти-А- или анти-В-антител. Возможно у новорожденных и пациентов с угнетением гуморального иммунитета;
всего страниц: 10

ЛИТЕРАТУРА [показать] .

1. Иммунологический подбор донора и реципиента при переливаниях крови, ее компонентов и трансплантациях костного мозга / Сост. Шабалин В. Н., Серова Л. Д., Бушмарина Т.Д. и др.- Ленинград, 1979.- 29 с.
2. Калеко С. П., Серебряная Н. Б., Игнатович Г. П. и др. Аллосенсибилизация при гемокомпонентной терапии и оптимизация подбора гистосовместимых пар "донор-реципиент" в военных лечебных учреждениях/ Методич. рекомендации.- С.-Петербург, 1994.- 16 с.
3. Практическая трансфузиология / Ред. Козинец Г. И., Бирюкова Л. С., Горбунова Н.А. и др.- Москва: Триада-Т, 1996.- 435 с.
4. Руководство по военной трансфузиологии / Ред. Э. А. Нечаев. - Москва, 1991. - 280 с.
5. Руководство по трансфузионной медицине / Под ред. Е. П. Сведенцова. - Киров, 1999.- 716с.
6. Румянцев А. Г., Аграненко В. А. Клиническая трансфузиология.- М.: ГЭОТАР МЕДИЦИНА, 1997.- 575 с.
7. Шевченко Ю.Л., Жибурт Е.Б., Безопасное переливание крови: Руководство для врачей.- СПб.: Питер, 2000.- 320 с.
8. Шевченко Ю.Л., Жибурт Е.Б., Серебряная Н.Б. Иммунологическая и инфекционная безопасность гемокомпонентной терапии.- СПб.: Наука, 1998.- 232 с.
9. Шиффман Ф.Дж. Патофизиология крови / Пер. с англ.- М.- СПб.: Издательство БИНОМ - Невский диалект, 2000.- 448 с.
10. Blood transfusion in Clinical Medicine / Ed. P.L.Mollison, C. P. Engelfriet, M. Contreras.- Oxford, 1988.- 1233 p.

Источник : Медицинская лабораторная диагностика, программы и алгоритмы. Под ред. проф. Карпищенко А.И., СПб, Интермедика, 2001

Группы крови - это нормальные передающиеся по наследству различные иммунологические признаки крови. На основании этих признаков всех людей подразделяют на четыре группы вне зависимости от расовой принадлежности, возраста и пола. Группа крови у человека остается постоянной в течение всей его жизни. Люди одной группы крови отличаются от людей других групп крови наличием или отсутствием у них агглютиногенов (А и В), содержащихся в эритроцитах, и агглютининов α и β, содержащихся в сыворотке.

Группы крови системы AB0: 0(I) группа крови содержит агглютинины α и β, агглютиногены в ней отсутствуют; А (II) группа крови - агглютинин α и агглютиноген А; В(III) группа крови-агглютинина и агглютиноген В; AB(IV) группа крови - содержит агглютиногены А и В, агглютинины отсутствуют.

Реципиент - человек, которому переливают кровь, донор - человек, дающий свою кровь для переливания. Идеально совместимой для реципиента является кровь такой же группы. Кровь абсолютно несовместима, если у реципиента имеются агглютинины к эритроцитам донора, так как в этих случаях происходит соединение агглютиногена А одной крови с агглютинином а другой или агглютиногена В с агглютинином β. Развивается так называемая , т. е. склеивание эритроцитов в маленькие и большие комочки. Переливание несовместимой крови приводит к тяжелым последствиям и может быть причиной смерти. Реципиенту 0(I) группы нельзя переливать кровь никакой другой группы, кроме той же. У реципиента AB(IV) группы никаких агглютининов нет, поэтому ему можно переливать кровь всех групп. Реципиент AB(IV) группы - универсальный реципиент. Кровь 0(I) группы можно перелить людям с любой группы крови. Поэтому людей с 0(I) группой называют универсальными донорами.

Помимо агглютиногенов А и В, в эритроцитах встречаются иногда и другие агглютиногены (например, и др.). В тех случаях, когда кровь несовместима по резус-фактору (см.), производить переливание также нельзя во избежание серьезных осложнений, связанных с разрушением эритроцитов (гемолизом).

Перед каждым переливанием крови, проводимым по назначению и под наблюдением врача, необходимо обязательно проводить определение группы крови и выявлять ее совместимость.

Рис. 1-4. Определение групп крови со стандартными сыворотками (А, В, 0).
Рис. 1. Испытуемая кровь группы 0(I).
Рис. 2. Испытуемая кровь группы А (II).
Рис. 3. Испытуемая кровь группы В (III).
Рис. 4. Испытуемая кровь группы АВ (IV).

Методика определения групп крови . Для определения группы крови приготовляют чистую тарелку, карандаш для стекла, стандартные сыворотки 0(I), А(II) и В(III) группы крови, флаконы с изотоническим раствором хлорида натрия, спиртом и йодом, гигроскопическую вату, предметное стекло или стеклянные палочки и три пипетки, которые должны быть сухими (вода разрушает ).

Тарелку разделяют карандашом на три сектора, которые обозначают 0(I), А(I), В(III). На соответствующий сектор различными пипетками наносят по одной крупной капле стандартной сыворотки 0(I), А(II), В(III) группы крови. После того как из пипетки выпущена капля сыворотки, ее немедленно опускают в тот флакон, из которого она была взята. Палец перед взятием крови обтирают спиртом. После укола в мякоть пальца иглой выжимают каплю крови. Стеклянной палочкой или углом чистого предметного стекла переносят три капли крови (каждая величиной с булавочную головку) на тарелку рядом с сыворотками 0(I), А(II) и В(III) группы крови. Отметив на часах время, каждый раз новыми стеклянными палочками перемешивают кровь поочередно с сыворотками группы крови 0(I), А(II) и В(III), пока смесь не станет равномерно розового цвета. Определение группы крови производят в течение 5 мин. (следить по часам). По истечении этого времени к каждой капле смеси добавляют по одной капле изотонического раствора хлорида натрия. После этого тарелку с кровью слегка покачивают, наклоняя в разные стороны так, чтобы смеси хорошо перемешались с изотоническим раствором хлорида натрия, но не растекались по стеклу. При положительной реакции в течение первых минут от начала перемешивания еще до прибавления изотонического раствора в смеси появляются мельчайшие красные зернышки, состоящие из склеившихся эритроцитов. Мелкие зернышки сливаются в более крупные, а иногда в хлопья разной величины (явление агглютинации). При отрицательной реакции смесь остается равномерно окрашенной в розовый цвет. При проведении пробы с тремя перечисленными выше сыворотками для каждой группы крови может выпасть определенная комбинация положительных и отрицательных реакций (рис. 1-4). Если все три сыворотки дали отрицательную реакцию, т. е. все смеси остались равномерно окрашенными в розовый цвет, испытуемая кровь принадлежит 0(I) группе. Если отрицательную реакцию дала только сыворотка А(I) группы крови, а сыворотки 0(I) и В(III) группы крови дали положительную реакцию, т. е. в них появились зерна, то испытуемая кровь принадлежит к А(II) группе. Если сыворотка В(III) группы крови дала отрицательную реакцию, а сыворотки 0(I) и А(II) группы крови - положительную, то испытуемая кровь относится к В(III) группе. Если все три сыворотки дали положительные реакции, т. е. всюду появилась зернистость, испытуемая кровь относится к AB(IV) группе. Всякие иные комбинации указывают на ошибку в определении. Причины ошибок при определении групп крови и меры их предотвращения. 1. Избыток крови, если взята слишком большая капля. Капля крови должна быть в 10 раз меньше, чем капля сыворотки. 2. Если сыворотки слабы или эритроциты испытуемого плохо склеиваются, можно просмотреть агглютинацию (см.), так как реакция начинается поздно или бывает слабо выражена. Необходимо брать надежные сыворотки, активность которых проверена и срок годности не истек. 3. При низкой температуре окружающего воздуха может наступить неспецифическая холодовая агглютинация - панагглютинация. Прибавление изотонического раствора хлорида натрия с последующим покачиванием тарелки обычно уничтожает холодовую агглютинацию. Чтобы избежать этого, температура окружающего воздуха должна быть не ниже 12 и не выше 25°. 4. При долгом наблюдении смесь начинает подсыхать с периферии, где иногда появляется зернистость. При отсутствии зернистости в жидкой части смеси можно говорить об отрицательной реакции агглютинации.

Определив группу крови, врач должен тотчас же сделать запись на лицевом листе . После окончания работы тарелку, пипетки и предметные стекла нужно тщательно вымыть под краном теплой водой, вытереть насухо и поставить в шкаф. в ампулах или флаконах хранятся в сухом и теплом помещении в запертом на ключ шкафу при t° не выше 20°.

Определение группы крови по стандартным эритроцитам (так называемая двойная реакция) применяют лишь в лабораториях и на станциях . В повседневной работе пользуются реакцией агглютинации со стандартными сыворотками по описанной выше методике.

В зависимости от разновидностей антигенов, входящих в состав кровяных телец (эритроцитов) определяется конкретная группа крови. У каждого человека она постоянна и не изменяется с рождения до смерти.

Количество эритроцитов определяет группу крови

Кто открыл группу крови у человека

Идентифицировать класс биологического материала человека получилось у австрийского иммунолога Карла Ландштейнера в 1900 году. В это время было определено только 3 разновидности антиген в мембранах эритроцитов – А, В и С. В 1902 году получилось выявить 4 класс эритроцитов.

Карл Ландштейнер первым открыл группы крови

Карл Ландштейнер смог сделать ещё одно важное достижение в медицине. В 1930 году учёный в тандеме с Александром Винером открыл резус-фактор крови (отрицательный и положительный).

Классификация и характеристика групп крови и резус-фактора

Групповые антигены классифицируются по единой системе АВ0 (а, б, ноль). Установленная концепция разделяет состав кровяных телец на 4 основных вида. Их отличия в альфа и бета агглютининах в плазме, а также присутствие специфических антигенов на оболочке эритроцитов, которые обозначаются буквами А и В.

Таблица «Характеристика классов крови»

Резус-фактор

Помимо системы АВ0, биологический материал классифицируют по фенотипу крови – наличию или отсутствию в ней специфического антигена D, который называется резус-фактором (Rh). Кроме белка D, система Rh охватывает ещё 5 основных антиген – C, c, d, E, e. Они содержатся во внешней оболочке эритроцитов.

Резус-фактор и класс кровяных телец закладываются у ребёнка ещё в утробе матери, и передаются ему от родителей на всю жизнь.

Методика определения группы крови и резус-фактора

Методы выявления групповой принадлежности

Для обнаружения в эритроцитах специфических антигенов используется несколько методов:

• простая реакция – берётся стандартная сыворотка 1, 2 и 3 класса, с которой сравнивается биологический материал пациента;
• двойная реакция – особенностью методики является использование не только стандартных сывороток (сравниваются с исследуемыми кровяными тельцами), но и стандартных эритроцитов (сопоставляются с сывороткой пациента), которые предварительно готовятся в центрах переливания крови;
• моноклинальные антитела – используются циклоны анти-А и анти-В (готовятся при помощи генной инженерии из крови стерильных мышей), с которыми сравнивается исследуемый биологический материал.

Метод выявления группы крови по моноклинальным антителам

Сама специфика исследования плазмы на предмет её групповой принадлежности заключается в сравнении образца биологического материала пациента со стандартной сывороткой или стандартными эритроцитами.

Последовательность такого процесса следующая:

• забор венозной жидкости натощак в количестве 5 мл;
• распределение стандартных образцов на предметном стекле или специальной тарелке (каждый класс подписывается);
• параллельно образцам размещается кровь пациента (количество материала должно быть в несколько раз меньше объема капель стандартной сыворотки);
• смешивается кровяная жидкость с заготовленными образцами (простая или двойная реакция) или с циклонами (моноклинальные антитела);
• через 2,5 минуты в те капли, где произошла агглютинация (образовались белки группы А, В или АВ) добавляется специальный физраствор.

Наличие агглютинации (склеивание и выпадение в осадок эритроцитов с соответствующими антигенами) в биологическом материале даёт возможность отнести эритроциты к тому или иному классу (2, 3, 4). А вот отсутствие такого процесса свидетельствует о нулевом (1) виде.

Как определить резус-фактор

Существует несколько методов выявления Rh-принадлежности – использование антирезусных сывороток и моноклинального реагента (белков группы D).

В первом случае порядок проведения следующий:

• забор материала происходит из пальца (допускается использование консервированной крови или самих эритроцитов, которые образовались после отстаивания сыворотки);
• в пробирку помещается 1 капелька антирезусного образца;
• в заготовленный материал наливается капля исследуемой плазмы;
• небольшое взбалтывание позволяет сыворотки равномерно расположиться в стеклянной таре;
• спустя 3 минуты в тару с сывороткой и исследуемыми кровяными тельцами добавляется раствор натрия хлорида.

После нескольких переворачиваний пробирки, специалист проводит расшифровку. Если агглютинины появились на фоне осветлённой жидкости, речь идёт о Rh+ — положительном резус-факторе. Отсутствие изменений в цвете и консистенции сыворотки свидетельствует об отрицательном Rh.

Определение группы крови по системе резус

Изучение резуса при помощи моноклинального реагента подразумевает использование цоликлон анти-D супер (специальный раствор). Порядок проведения анализа включает несколько этапов.

1. Реагент (0,1 мл) наносится на подготовленную поверхность (тарелку, стекло).
2. Рядом с раствором помещается капля крови пациента (не больше 0,01 мл).
3. Две капли материала смешиваются.
4. Проведение расшифровки происходит через 3 минуты с начала исследования.

У большинства людей на планете в эритроцитах присутствует агглютиноген системы резус. Если рассматривать в процентах, то у 85% реципиентов есть белок D и они являются резус-положительными, а у 15% он отсутствует – это резус-отрицательный фактор.

Совместимость

Совместимость крови являет собой соответствие по группе и резус-фактору. Такой критерий очень важен при переливании жизненно важной жидкости, а также в период планирования беременности и вынашивании плода.

Какая группа крови будет у ребёнка

Наука генетика предусматривает наследование детьми групповой принадлежности и резуса от родителей. Гены передают информацию о составе кровяных телец (агглютинин альфа и бета, антигенов А, В), а также о Rh.

Таблица «Наследование групп крови»

Смешение групп эритроцитов с различными Rh ведёт к тому, что у ребёнка резус-фактор может быть как «плюс», так и «минус».

1. Если Rh одинаковый у супругов (присутствуют антитела группы D) – дети в 75% унаследуют доминирующий белок, а в 25% он будет отсутствовать.
2. В случае отсутствия специфического белка D в оболочках эритроцитов мамы и папы ребёнок также будет резус-отрицательным.
3. У женщины Rh-, а у мужчины Rh+ – сочетание предполагает наличие или отсутствие резуса у ребёнка в соотношении 50 на 50, при этом возможен конфликт антиген мамы и малыша.
4. Если у матери Rh+, а у отца анти-D отсутствует – резус передастся малышу с вероятностью 50 на 50, но риска конфликта антител нет.

Важно понимать, что резус-фактор передаётся на генетическом уровне. Поэтому, если родители резус-положительные, а ребёнок родился с Rh-, мужчинам не стоит спешить ставить под сомнение своё отцовство. У таких людей в роду просто есть человек без доминирующего белка D в эритроцитах, что и унаследовал малыш.

Группа крови для переливания

При осуществлении гемотрансфузии (переливании крови) важно соблюдать совместимость групп антигенов и резуса. Специалисты руководствуются правилом Оттенберга, которое гласит – кровяные тельца донора не должны склеиваться с плазмой реципиента. В малых дозах они растворяются в большом объёме биологического материала пациента и не выпадают в осадок. Такой принцип действует в случае переливания жизненно важной жидкости до 500 мл и не подходит, когда у человека сильная потеря крови.

Представителям редкого 4 класса для гемотрансфузии подойдёт 1, 2 и 3 вид кровяной жидкости. Они считаются универсальными реципиентами (люди, которым вливают кровь).

Пациентам с 1 (0) положительной для переливания подойдёт 1 класс (Rh+/-), в то время, как человеку с отрицательным резусом можно вливать только нулевую с Rh-.

Людям, у которых 2 положительная, подходит 1 (+/-) и 2 (+/-). Пациентам с Rh- можно применять только 1 (-) и 2 (-). Аналогичная ситуация и с 3 классом. Если Rh+ – можно вливать 1 и 3 как положительную, так и отрицательную. В случае Rh-, подойдёт только 1 и 3 без анти-D.

Совместимость при зачатии

При планировании беременности, большое значение имеет сочетание резус-фактора мужчины и женщины. Это делается во избежание резус-конфликта. Такое бывает, когда у матери Rh-, а ребёнок унаследовал Rh+ от отца. При попадании доминирующего белка в кровь человека, где его нет, может возникнуть иммунологическая реакция и выработка агглютининов. Такое состояние провоцирует сцепление полученных эритроцитов и дальнейшее их разрушение.

Таблица совместимости крови для зачатия ребенка

Несовместимость резусов матери и ребёнка при первой беременности не несёт опасности, а вот перед вторым зачатием лучше разорвать выработку антирезусных тел. Женщине вводят специальный глобулин, который разрушает иммунологические цепочки. Если этого не сделать, резус-конфликт способен спровоцировать прерывание беременности.

Может ли меняться группа крови?

В медицинской практике есть случаи изменения групповой принадлежности при беременности или вследствие перенесённых тяжёлых заболеваний. Это объясняется тем, что при подобных состояниях возможно сильное увеличение выработки красных кровяных телец. При этом замедляется склеивание и разрушение эритроцитов. В анализе подобное явление отражается как изменение маркеров в составе плазмы. Со временем всё становится на свои места.

Класс крови, как и резус-фактор, у человека закладывается генетически ещё до рождения и не может меняться в течение всей жизни.

Диета по группе крови

Главный принцип питания по групповой принадлежности заключается в подборе продуктов, которые близки организму генетически и позволяют наладить работу пищеварительной системы, а также похудеть.

Первым, кто предложил учитывать группу крови при выборе пищи, стал американец Питер Д’Адамо. Врач натуропат издал несколько книг, в которых изложил свою идею здорового питания. Если правильно выбирать еду, можно забыть о плохом усвоении полезных веществ и проблемах с желудком, кишечником.

Таблица «Диета по группе крови»

Диета по групповой принадлежности подразумевает ограничение алкоголя, табакокурения. Немаловажным является активный образ жизни – бег, пешей ходьбой на свежем воздухе, плаваньем.

Особенности характера по группе крови

Группа крови влияет не только на физиологические особенности организма, но и на характер человека.

Нулевая группа

В мире около 37% носителей нулевой группы крови.

Главными особенностями их характера являются:

• стрессоустойчивость;
• лидерские задатки;
• целеустремленность;
• энергичность;
• смелость;
• амбициозность;
• коммуникабельность.

Обладатели нулевой группы предпочитают заниматься опасными видами спорта, любят путешествовать и не бояться неизвестности (легко берутся за любую работу, быстро обучаются).

2 группа

Наиболее распространённой группой считается 2 (А). Её носители – это сдержанные люди, которые способны найти подход к самым сложным личностям. Они стараются избегать стрессовых ситуаций, всегда дружелюбны и трудолюбивы. Обладатели 2 группы очень хозяйственны, добросовестно выполняют свои обязанности и всегда готовы помочь.

Среди недостатков характера выделяют упрямство и неумение чередовать работу с отдыхом. Таких людей трудно растормошить на какие-то необдуманные поступки или неожиданные мероприятия.

3 группа

Человек, в крови которого преобладают антигены группы В, натура переменчива. Такие люди отличаются повышенной эмоциональностью, креативностью и независимостью от мнения окружающих. Они с лёгкостью пускаются в путешествия, берутся за новые дела. В дружбе – преданы, в любви – чувственны.

Среди негативных качеств часто проявляются:

• частая переменчивость в настроении;
• непостоянство в поступках;
• высокие требования к окружающим.

Обладатели 3 группы крови часто пытаются спрятаться от реалий мира в своих фантазиях, что не всегда является положительной чертой характера.

4 группа

Носители 4 группы обладают хорошими лидерскими качествами, что проявляется в умении вести переговоры и быть собранными в ответственный момент. Такие люди коммуникабельны, легко сходятся с окружающими, в меру эмоциональны, многогранны и умны.

Несмотря на множество достоинств в характере, представители 4 группы часто не могут прийти к единому решению, мучаются от двойственности чувств (внутренний конфликт) и отличаются тугодумством.

Специфический состав крови и наличие в ней или отсутствие доминирующего фактора (антигена D) передаётся человеку с генами. Существует 4 группы крови и резус-фактор. Благодаря классификации по системе АВ0 и Rh специалисты научились безопасно переливать донорскую кровь, определять отцовство и избегать резус-конфликта во время ребёнка. Проверить свою групповую принадлежность каждый человек может в лаборатории, сдав биологический материал из пальца или вены.

Плазменные (сывороточные) антигены представляют собой определенные комплексы аминокислот или углеводов на поверх­ности молекул белков плазмы (сыворотки) крови.

ПОНЯТИЕ О ГРУППЕ КРОВИ

ГРУППА КРОВИ - это сочетание нормальных иммунологических и генетических признаков крови, кото­рое наследственно детерминировано и является биоло­гическим свойством каждого индивидуума.

Группы крови передаются по наследству, формируются на 3-4 меся­це внутриутробного развития и остаются неизменными в течение всей жизни. Считается, что у человека группа крови включает несколько де­сятков антигенов в различных сочетаниях. Этих сочетаний - групп крови - реально может быть несколько миллиардов. Практически они оди­наковы лишь у однояйцевых близнецов, имеющих один и тот же генотип.

В практической медицине термин «группа крови», как правило, отражает сочетание эритроцитарных антигенов системы АВО и резус-фактора и соответствующих антител в сыворотке крови.

ГРУППОВЫЕ АНТИТЕЛА

Для каждого известного антигена обнаружены одно­именные антитела (анти-А, анти-В, анти-резус, анти-Келл и т. д.). Груп­повые антитела крови - не такое постоянное свойство организма челове­ка, как антигены. Лишь в групповой системе АВО антитела являются нормальным врожденным свойством плазмы крови. Эти антитела (агглю­тинины а и b) постоянно присутствуют в плазме крови человека.

Определение группы крови по системе аво

1. Группы крови по системе аво

Под термином «совместимость» понимают сочетание крови донора и реципиента по антигенам и антителам, не вызывающее иммунологи-ческих взаимодействий.

В зависимости от наличия в эритроцитах агглютиногенов А и В, а в сыворотке соответствующих им агглютининов а и b, все люди разделены на четыре группы:

Группа О (I) - в эритроцитах агглютиногенов нет, в сыворотке агглютинины а и b.

Группа А (II) - в эритроцитах агглютиноген А, в сыворотке агг­лютинин b.

Группа В (III) - в эритроцитах агглютиноген В, в сыворотке агг­лютинин а.

Группа АВ (IV) - в эритроцитах агглютиногены А и В, агглюти­нинов в сыворотке нет.

Антиген А не является однородным, существует два основных его подтипа: В соответствии с этим группа А (II) имеет две подгруппы А(П) и А 2 (II), а группа АВ (IV) - АВ (IV) и А 2 В (IV).

Групповой антиген В отличается большей однородностью, хотя описаны редкие его варианты. Однако существенного кли­нического значения это не имеет.

Методика определения групп крови

Групповая принадлежность крови по системе АВО оп­ределяется с помощью реакции агглютинации. В настоящее время ис­пользуют три способа определения групп крови по системе АВО:

По стандартным изогемагглютинирующим сывороткам,

По стандартным изогемагглютинирующим сывороткам и стандар­тным эритроцитам (перекрестный способ),

С помощью моноклональных антител (цоликлонов анти-А и аити-В).

При плановом исследовании врач стационара определяет группу кро­ви по стандартным изогемагглютинирующим сывороткам или с помощью цоликлонов, после чего посылает кровь в серологическую лабораторию для проверки группы перекрестным методом.

Группа крови считается определенной только тогда, когда лаборато­рия подтвердила данные, полученные врачом стационара. Если резуль­таты исследований расходятся между собой, оба исследования нужно повторить.

В экстренном поряд­ке (при кровотечении необходимо срочное переливание крови), врач ста­ционара определяет группу сам (в лаборатории перепроверка произво­дится, но постфактум).

ОПРЕДЕЛЕНИЕ ГРУПП КРОВИ ПО СТАНДАРТНЫМ ИЗОГЕМАГГЛЮТИНИРУЮЩИМ СЫВОРОТКАМ

Наиболее распространен в клиничес­кой и лабораторной практике.

Суть метода сводится к обнаружению в испытуемой крови групповых антигенов А и В с помощью стандартных изогемагглютинирующих сы­вороток. Проводят в помещении с хорошим освещением при темпера­туре 15-25°С.

а) Необходимое оснащение

Стандартные изогемагглютинирующие сыворотки групп О (I), А (II), В (III) и АВ (IV) двух различных серий. Сыворотка должна быть прозрачной, без признаков гниения. Для удобства стандартные гемагглютинирующие сыворотки различ­ных групп подкрашивают в определенный цвет: О (I) - бесцвет­ная (серая), А (II) - синяя, В (III) - красная, АВ (IV) - ярко-желтая. Следует отметить, что указанные цвета сопутствуют всем этикеткам на препаратах крови, имеющих групповую принадлеж­ность (кровь, эритроцитная масса, плазма и др.).

Белые фарфоровые или эмалированные тарелки или любые дру­гие пластинки со смачиваемой поверхностью, маркированные 0(1), А(П), В(Ш), AB(IV).

Изотонический раствор хлорида натрия.

Иглы, пипетки, стеклянные палочки (предметные стекла).

б) Техника проведения реакции

1. На тарелку (пластинку) наносят стандартные изогемагглютииирующие сыворот­ки I, II, Ш групп в объеме 0,1 мл (одна большая капля около 1 см в диаметре). Во избежание ошибок наносят две серии сывороток каждой из групп. Всего получается 6 капель.

2. Шесть ка­пель исследуемой крови величиной приблизительно с булавочную головку 0,01 мл (маленькая капля) последовательно переносят су­хой стеклянной палочкой на пластину в 6 точек, каждую рядом с каплей стандартной сыворотки (количество испытуемой крови дол­жно быть приблизительно в 10 раз меньше количества стандартной сыворотки), потом их осторожно с по­мощью стеклянных палочек с закругленными краями перемеши­вают.

3. После смешивания тарелку периодически покачивают.

Агглютинация начинается в течение первых 10-30 секунд.

4. В те капли, где произошла агглютинация, добавляют по одной капле изотонического раствора хлорида натрия, после чего оценивают ре­зультат реакции.

При положительной реакции обычно в течение первых 10-30 секунд в смеси появляются видимые невооруженным взглядом мелкие красные зернышки (агглютинаты), состоящие из склеенных эритроцитов.

Если сыворотки всех трех групп дали положительную реакцию, это указывает на то, что испытуемая кровь содержит оба агглютиногена - А и В и принадлежит к группе AB(IV). Однако в таких случаях для исключения неспецифической ре­акции агглютинации (холодовая агглютинация, пангглютинация, аллергия) необходимо провести дополнительное контрольное исследование испытуемой крови со стандартной изогемагглютинирующей сывороткой группы AB(IV), не содержащей агглютининов. Лишь отсутствие агглютинации в этой капле при наличии агглютинации в каплях, содержащих стандартные сыворотки групп 0(1), A(II) и B(III), позволяет считать реакцию специфической и отнести исследуемую кровь к группе АВ 0 (IV).

Следует отметить, что при наличии в исследуемой крови слабого под­типа антигена А, реакция агглютинации с гемагглютинирующими сы­воротками групп 0(1) и В(Ш) начинается позже (на 3-4 минуте). Для точного определения подтипа антигена А необходимо проведение допол­нительной реакции с так называемым анти-А, реактивом.

ОПРЕДЕЛЕНИЕ ГРУПП КРОВИ ПО СТАНДАРТНЫМ ИЗОГЕМАГГЛЮТИНИРУЮЩИМ СЫВОРОТКАМ И СТАНДАРТНЫМ ЭРИТРОЦИТАМ (ПЕРЕКРЕСТНЫЙ СПОСОБ)

Способ наиболее часто используется в серологических лабораториях. Суть метода состоит в определении наличия или отсутствия в иссле­дуемой крови групповых антигенов А и В с помощью стандартных изо-гемагглютинирующих сывороток, а также групповых антител а и b с по­мощью стандартных эритроцитов.

Оснащение для реакции со стандартными эритроцитами отлича­ется тем, что для реакции агглютинации необходимы стандарт­ные эритроциты трех групп крови: 0(1), А(II), В(III).

Стандартные эритроциты приготавливают из крови доноров с за­ранее известной группой крови, хранят при 4-8°С.

На маркированную тарелку пипеткой в шесть ячеек наносят по од­ной большой капле сыворотки исследуемой крови из пробирки (0,1мл), а рядом с ними - по одной маленькой капле (0,01мл) стан­дартных эритроцитов групп 0(1), А(П), В(Ш) (по две серии).

Особенностью трактовки результатов реакции со стандартными эрит­роцитами является то, что эритроциты группы 0(1) являются контрольны­ми (в них нет антигенов, что делает принципиально невозможной специ­фическую реакцию агглютинации с любой сывороткой).

ОПРЕДЕЛЕНИЕ ГРУПП КРОВИ МОНОКЛОНАЛЬНЫМИ АНТИТЕЛАМИ

Для определения группы крови используются моноклональные анти­тела, для получения которых применяется гибридомная биотехнология.

Гибридома - это клеточный гибрид, образованный путем слияния клетки опухоли костного мозга (миеломы) с иммунным лимфоцитом, син­тезирующим специфические моноклональные антитела. Гибридома при­обретает свойства обоих «родителей»: способность к неограниченному росту, характерную для опухолевой клетки, и возможность синтезиро­вать антитела, присущую иммунному лимфоциту.

Разработаны стандартные реагенты - моноклональные антитела (МКА): цоликлоны анти-А и анти-В, которые применяют для определе­ния агглютиногенов эритроцитов. Цоликлоны представляют из себя лиофилизированный порошок красного (анти-А) или синего (анти-В) цве­та, который разводят изотоническим раствором хлористого натрия непосредственно перед исследованием.

Цоликлоны анти-А и анти-В наносят на белый планшет по одной боль­шой капле (0,1 мл) под соответствующими надписями: анти-А или анти-В. Рядом с каплями антител наносят по одной маленькой капле (0,01мл) исследуемой крови. После перемешивания составных частей за реакци­ей агглютинации наблюдают в течение 2-3 мин.

ОПРЕДЕЛЕНИЕ РЕЗУС-ФАКТОРА

В 1940 г. К. Ландштейнер и А. С. Винер обнаружили в эритроцитах человека совершенно новый антиген, названный ими ре­зус-фактором (Rh). Резус-фактор присутствует в крови 85% людей, а 15% лиц этого фактора не содержат. Так он назван, по имени макаки Резус, у которой он всегда имеется.

Антигены резус относят к липопротеидам. Они являются очень актив­ными и способны вызывать образование иммунных антител.

Наличие резус-антигена выявляется у человеческого плода начиная с 5-8 недели и хорошо выражено у 3-4-месячного эмбриона.