8.2.3.13.1 Minimalne debljine redaka, slova i veličine slova

Kriteriji za antimikrobno djelovanje lijeka su minimalna inhibitorna koncentracija(MIC) i minimalna baktericidna koncentracija(MBK). MIC je najniža koncentracija antibiotika koja potpuno inhibira in vitro vidljivo rast bakterija. Izražava se u mg/l ili µg/ml. MBC je najniža koncentracija antibiotika koja uzrokuje baktericidni učinak. Da bi se to odredilo, potrebno je izvršiti sijanje iz epruveta u kojima vizualno nema rasta, na gustom hranjivom agaru koji ne sadrži antibiotik. Ovaj pokazatelj ima veliku klinički značaj. Na temelju metode serijskih razrjeđenja stvorene su mikrometode koje podrazumijevaju korištenje manjeg volumena hranjive podloge. Trenutno se proizvode brojni komercijalni setovi za ovakvu vrstu istraživanja, koji se sastoje od osušenih, stabiliziranih otopina antibiotika u hranjivom mediju, koji su razrijeđeni testnom suspenzijom mikroba. Ovi se kompleti mogu pohraniti u normalnim uvjetima, čime se eliminira potreba za pripremom razrjeđenja medija i antibiotika u laboratoriju. Još jedna prednost mikrodilucijskih testova je ta što su uključeni u automatizirani sustav.

Na temelju dobivenih podataka (promjer zone inhibicije rasta ili MIC vrijednosti) mikroorganizme dijelimo na osjetljive, srednje rezistentne i rezistentne. Za razlikovanje ovih kategorija koriste se takozvane granične koncentracije antibiotika koje nisu konstantne vrijednosti. Oni se revidiraju kako se osjetljivost populacije mikroorganizama mijenja. U izradi i reviziji kriterija tumačenja angažirani su vodeći stručnjaci (kemoterapeuti, mikrobiolozi) koji su članovi posebnih povjerenstava. Jedan od njih je Nacionalni odbor za kliničke laboratorijske standarde ( N acionalni C povjerenik za C klinički L aboratorij S tandards - NCCLS), organiziran u SAD-u. Trenutno se NCCLS standardi koriste kao međunarodni standardi za ocjenu rezultata određivanja osjetljivosti bakterija u multicentričnim mikrobiološkim i kliničkim studijama.

Određivanje osjetljivosti bakterija na antibiotike. Kriterij za osjetljivost mikroorganizama na antibiotike je minimalna inhibitorna koncentracija (MIC) antibiotika, koja usporava rast patogena u standardnim eksperimentalnim uvjetima.

Za utvrđivanje rezistencije na lijekove koristi se dnevna čista kultura uzročnika izolirana iz organizma bolesnika, te standardna hranjiva podloga (AGV ili Muller-Hinton agar) za njegovu inokulaciju.

Određivanje osjetljivosti mikroorganizama na antibiotike provodi se metodom difuzije diska ili metodom serijskih razrjeđenja antibiotika u tekućim ili čvrstim medijima.

Disk difuzijska metoda. Određivanje osjetljivosti na antibiotike metodom papirnatih diskova temelji se na difuziji antibiotika u hranjivi medij. Koncentracija antibiotika u diskovima je odabrana tako da promjeri zona inhibicije rasta standardnih test mikroorganizama odgovaraju međunarodnim standardima. Ova koncentracija odgovara prosječnoj terapijskoj dozi za standardne sojeve mikroorganizama.

Pripremljena suspenzija mikroorganizama inokulira se na površinu posebne podloge (AGV ili Mueller-Hinton agar) u Petrijeve zdjelice. Zatim se sterilnom pincetom na zasijanu površinu postavljaju standardni papirnati diskovi natopljeni otopinama raznih antibiotika na jednakoj udaljenosti jedna od druge, od rubova i središta posude (možete koristiti i posebne uređaje i dozatore). Zasađene čašice drže se u termostatu na temperaturi optimalnoj za rast ispitivanih bakterija. Ako su bakterije osjetljive na ovaj antibiotik, tada se oko diska formira zona inhibicije rasta. Promjer zone inhibicije rasta odgovara stupnju osjetljivosti proučavanog mikroorganizma na ovaj antibiotik. Konačni rezultat ocjenjuje se prema posebnim tablicama, koje označavaju promjere zona inhibicije rasta standardnih kultura, osjetljivih, otpornih i srednje otpornih.

Disk metoda ne daje pouzdane podatke za određivanje osjetljivosti mikroorganizama na polipeptidne antibiotike koji slabo difundiraju u agar (primjerice, polimiksin, ristomicin). Također, ova metoda ne dopušta određivanje minimalne inhibitorne koncentracije antibiotika.

Metoda serijskog razrjeđivanja. Ovom se metodom određuje minimalna koncentracija antibiotika koja inhibira rast ispitivane bakterijske kulture (IPC, MIC). Da biste to učinili, prvo pripremite temeljnu otopinu koja sadrži određenu koncentraciju antibiotika (µg/ml ili IU/ml) u posebnom otapalu ili puferskoj otopini. Nadalje, sva sljedeća razrjeđenja u bujonu (u volumenu od 1 ml) pripremaju se iz glavne otopine, nakon čega se u svako razrjeđenje dodaje 0,1 ml ispitivane bakterijske suspenzije koja sadrži 10 6 -10 7 bakterijskih stanica po 1 ml. U posljednju epruvetu dodajte 1 ml bujona (bez antibiotika) i 0,1 ml bakterijske suspenzije (kontrola kulture). Usjevi se inkubiraju na 37 0 C do sljedećeg dana, nakon čega se bilježe rezultati pokusa na mutnoću hranjive podloge u usporedbi s kontrolom. Posljednja epruveta s prozirnom hranjivom podlogom ukazuje na usporavanje rasta proučavane bakterijske kulture, pod utjecajem minimalne inhibitorne (inhibitorne) koncentracije (MIC, MIC) antibiotika sadržanog u njoj. Za procjenu minimalne baktericidne koncentracije (MBC), sjetva se provodi na gustoj hranjivoj podlozi bez antibiotika iz epruveta bez rasta. MBC se uzima kao minimalna koncentracija antibiotika koja uzrokuje smrt mikroorganizma, što je karakterizirano odsutnošću rasta na Petrijevim zdjelicama s hranjivim medijem.

Metoda serijskih razrjeđenja antibiotika u agar mediju. U tom slučaju moguće je u jednom pokusu ispitati osjetljivost više kultura mikroorganizama na različite koncentracije određenog antibiotika. Različita razrjeđenja antibiotika pripremaju se u sterilnom agar mediju. Za to se doda potrebna količina početne otopine antibiotika, temeljito promiješa i izlije u sterilne Petrijeve zdjelice. Nakon što se agar skrutne, dno čaše se markerom podijeli izvana u sektore. Svaka proučavana kultura se sije pomoću bakteriološke petlje na određenom sektoru u posudama s različitim koncentracijama antibiotika. Inokulacija testnih kultura na pločice s različitim koncentracijama antibiotika može se obaviti pomoću aplikatora koji omogućuje istovremeno cijepljenje 12-15 kultura po pločici. Zatim se čašice stavljaju u termostat na temperaturu koja je optimalna za rast i razvoj proučavanih bakterija. Rezultati se uzimaju u obzir prisutnošću ili odsutnošću rasta bakterija u usporedbi s rastom na mediju u kontrolnoj zdjelici. Bakterije se smatraju osjetljivima na antibiotik u koncentraciji pri kojoj je njihov rast potpuno potisnut.

E-test metoda. Ova metoda kombinira prednosti metode serijskog razrjeđivanja i metode diska. Umjesto diskova koriste se trake ("ravnala") filtar papira impregniranog antibiotikom, pri čemu će na dnu trake koncentracija antibiotika biti minimalna, a na "vrhu" - maksimalna. Trake se stavljaju na površinu hranjivog agara inokuliranog kulturom koja se proučava. Ako su bakterije osjetljive na djelovanje ovog lijeka, pojavljuje se elipsoidna zona inhibicije rasta oko područja trake koja sadrži njegove inhibitorne koncentracije. Brojčana vrijednost koncentracije antibiotika u dnu ove zone označava MIK tog antibiotika za taj usjev.

Do osjetljiv uključuju sojeve mikroorganizama čiji je rast inhibiran pri koncentracijama lijeka koje se nalaze u krvnom serumu pacijenta kada se koriste konvencionalne doze antibiotika.

Do umjereno stabilan uključuju sojeve čija inhibicija rasta zahtijeva koncentracije koje se stvaraju u krvnom serumu nakon primjene maksimalne doze droga.

održivi su mikroorganizmi čiji rast lijek ne suzbija u koncentracijama stvorenim u organizmu pri uporabi najvećih dopuštenih doza.

Test pitanja.

Definirajte pojam "antibiotici". Glavne skupine antibiotika, ovisno o načinu pripreme: prirodni, polusintetski, sintetski. Imenujte znanstvenika koji je razvio teoriju kemoterapije. Koja su svojstva presudna pri izboru kemoterapeutika? Što je kemoterapijski indeks, napišite njegovu formulu, što bi trebao biti? Navedite prve antispirohetalne lijekove; prvi antibakterijski lijek i ime znanstvenika koji ga je primio. Kako se zovu ruski znanstvenici koji su prvi otkrili antibakterijska svojstva zelene plijesni. Imenujte znanstvenika koji je proučavao antibakterijska svojstva gljive Penicillium i pokušao izolirati penicilin. Znanstvenici koji su prvi dobili pripravke penicilina. Proizvođači antibiotika - navedite primjere. Klasifikacija antibiotika prema porijeklu, kemijski sastav, prema spektru djelovanja. Mehanizam djelovanja antibiotika: mete (točke primjene antibiotika raznih skupina). Vrste djelovanja - baktericidno i bakteriostatsko; kako ih odrediti u pokusu in vitro? Antivirusni antibiotici, mehanizmi njihovog djelovanja. U kojim jedinicama se mjeri aktivnost antibiotika? uvjeti skladištenja antibiotika.

Navedite i opišite moguće nuspojave antibiotske terapije. Definirajte pojam rezistencije mikroba na lijekove. Vrste rezistencije na lijekove. Prirodni i stečeni (primarni i sekundarni). Genetski mehanizmi rezistencije na lijekove: kromosomski i plazmidni. Fenotipski mehanizmi rezistencije na lijekove - nazvati i opisati. Racionalna uporaba antibiotika - navesti metode. Navedite lijekove - inhibitore enzima koji uništavaju antibiotike. Opišite metode za određivanje osjetljivosti mikroba na antibiotike.

Analiza sposobnosti razmnožavanja i rasta bakterija na podlogama koje sadrže opadajuću koncentraciju ljekovite tvari omogućuje određivanje minimalne inhibitorne koncentracije antibiotika (MIC), koja inhibira ulogu bakterija in vitro (tablica 3(vet7). )). Vrijednost ove doze određuje izbor ljekovite tvari koja može postići slične koncentracije in vivo, te je osnova za usporedbu relativne osjetljivosti organizma u odnosu na druge lijekove. Vjeruje se da, kako bi se osigurala učinkovitost izloženosti, koncentracija lijeka u žarištu infekcije treba biti najmanje jednaka vrijednosti minimalne inhibitorne koncentracije antibiotika. S druge strane, koncentracija lijeka u plazmi obično mora biti veća kako bi se osigurale odgovarajuće koncentracije u tkivu. Međutim, neopravdano povećanje doza antimikrobika u svrhu postizanja minimalne doze antibiotika koja inhibira rast određene vrste bakterija in vitro može dovesti do nakupljanja lijeka u organizmu primatelja u toksičnim dozama.

"Kritični MIC" za određenu tvar lijeka je najviša razumno sigurna koncentracija lijeka koja se može postići klinički prihvatljivom dozom i načinom primjene lijeka (tablica 3(vet7)). MIK ovisi o specifičnoj vrsti bakterijske kulture i specifičnoj vrsti lijeka. U isto vrijeme, kritični MIC specifičan je za pojedinog primatelja i pojedinu tvar lijeka. Stoga će kritični MIC biti isti za svaki organizam (Tablica 3(vet7)). Vrijednost kritične koncentracije za određeni organizam može se razlikovati ovisno o vrsti životinje (zbog razlika u osjetljivosti ili u prirodi distribucije medicinski proizvod) i određeni laboratorij. Treba kontaktirati laboratorij koji daje metode kulture i podatke o osjetljivosti na antibiotike radi kritičnih vrijednosti koje će se koristiti u njihovim studijama.

Na temelju podataka in vitro razrjeđenja, bakterija se klasificira kao osjetljiva (S) na određenu ljekovitu tvar ako je MIK značajno ispod kritične vrijednosti ovog pokazatelja. Rast patogenih mikroorganizama s prosječnom (MS) ili srednjom (IS) vrijednošću osjetljivosti inhibiran je pri koncentracijama lijeka koje se približavaju kritičnoj vrijednosti MIK. Takve bakterije mogu izazvati negativne reakcije tijela pacijenta ili nemaju nikakav učinak na njega. MIC za rezistentne (R) bakterije prelazi kritičnu vrijednost minimalne doze. Učinkovita vrijednost koncentracije u tijelu pacijenta takvog lijeka koji utječe na određeni mikroorganizam vjerojatno se neće postići. U takvim slučajevima, rizik od nakupljanja lijeka u toksičnim dozama također može nadmašiti potencijalnu dobrobit terapije. Kritičnu vrijednost minimalne doze antibiotika nove generacije koji inhibiraju rast bakterija u nekim je slučajevima teže odrediti zbog prelaska na profesionalno fleksibilno označavanje raspona doza.

Ljekovite tvari moraju biti odabrane tako da se pri primjeni u skladu s režimom koji sprječava nakupljanje tvari u toksičnim dozama može postići maksimalna koncentracija ljekovite tvari u plazmi koja značajno premašuje MIK. Mnoge bakterije bit će osjetljive na učinke određenog lijeka u koncentracijama znatno ispod kritične minimalne doze. Razlika između kritične vrijednosti i intrinzične vrijednosti MIK može se koristiti za usporedbu relativne učinkovitosti različitih antimikrobnih sredstava. Na primjer, za amikacin kritična vrijednost je 32 µg/mL, tako da je E. coli s MIK vrijednošću od 2 µg/mL relativno osjetljivija na amikacin nego E. coli s MIK vrijednošću od 16 µg/mL. Obje bi se vrste trebale smatrati osjetljivima (iako se za drugu vrstu može smatrati da ima prosječnu osjetljivost), no čini se da je rast bakterija prve vrste inhibiran u većoj mjeri. Ako ista vrsta E. coli s MIK vrijednošću od 2 µg/mL za amoksicilin ima MIK vrijednost od 16 µg/mL (s kritičnom vrijednošću od 32 µg/mL), čini se da bi rast ovog mikroorganizma lakše inhibirati primjenom amikacina nego amoksicilina jer je MIC vrijednost amikacina udaljenija od kritične MIC vrijednosti od MIC vrijednosti amoksicilina.

Iako se razlike između vrijednosti MIC-a za određenu bakterijsku vrstu i određeni lijek (16 ili 32) mogu činiti prilično velikima (posebno u kontekstu granične vrijednosti lijeka u plazmi), ta razlika odgovara samo jednoj otopini u epruveti. . Ovo je primjer opasnosti od precjenjivanja podataka o osjetljivosti. Ako je vrijednost MIC-a za određeni organizam dovoljno blizu kritične vrijednosti, tada se zbog mogućih razlika u tumačenju tom mikroorganizmu u jednom laboratoriju može dodijeliti stupanj osjetljivosti "S" ili "MS", au drugom "R". Ovakva moguća odstupanja u procjeni jedan su od razloga zašto treba izbjegavati primjenu lijekova za koje određeni organizam ima "MS" osjetljivost (ili ako je vrijednost MIK blizu kritične), osim ako koncentracija lijeka na mjestu upale infekcija može daleko premašiti MIC vrijednost utvrđenu in vitro analizom. Glavni primjer bila bi uporaba lijekova koje izlučuju bubrezi za liječenje infekcije. mokraćni put ili korištenje lijekova koji se izlučuju u žuč za liječenje infekcije bilijarnog trakta. Akumulacija određenih lijekova u leukocitima (fluorokinoloni, makrolidi) također može rezultirati koncentracijama lijeka u tkivima koje su znatno iznad MIK (ili kritične MIC) unatoč nižoj koncentraciji u plazmi.

MIC bakterija može se promijeniti tijekom naknadnih infekcija istom bakterijskom vrstom, a može se promijeniti i tijekom samog procesa infekcije. Povećanje vrijednosti MIK-a može jednostavno odražavati drugačiji pristup evaluaciji rezultata analize (osobito ako se razlike otkriju samo pri razrjeđivanju in vitro), ali se može smatrati i posljedicom razvoja rezistencije na određenu tvar lijeka. U takvim slučajevima, tijek antimikrobne terapije može se modificirati upotrebom dodatni lijek ili prijelaz na novi, više učinkovit lijek. Kod polimikrobnih infekcija, vrijednost MIC-a određenog lijeka vjerojatno će biti različita za svaku bakteriju koja inficira. Smatra se da je lakše spriječiti rast bakterija s niskom MIK vrijednošću za pojedinu ljekovitu tvar nego rast mikroorganizma s višom MIK vrijednošću za istu ljekovitu tvar.

(MIC) - minimalna inhibitorna (supresivna) koncentracija - najniža koncentracija antibiotika koja inhibira vidljivi rast ispitivanog mikroorganizma in vitro(u hranjivim medijima bujona ili agara) u standardnim eksperimentalnim uvjetima i izražava se u µg/ml (mg/l) ili jedinicama/ml.

Minimalna baktericidna koncentracija (MBK) - najniža koncentracija antibiotika koja pri testiranju in vitro uzrokuje smrt 99,9% mikroorganizama od početne razine u određenom vremenskom razdoblju.

Osjetljiv mikroorganizam - soj mikroorganizma koji nema mehanizme otpornosti na ovaj lijek. Njegov na hranjivoj podlozi se zaustavlja kada se koristi antibiotik u terapijskoj dozi.

Srednje otporan mikroorganizam - soj mikroorganizma, čiji rast na hranjivoj podlozi prestaje tek kada se antibiotik koristi u najvišoj dozi. Liječenje infekcija uzrokovanih umjereno rezistentnim mikroorganizmima provodi se u nedostatku alternativnih lijekova, najvišom (maksimalnom terapijskom) dozom antibiotika.

Otporni mikroorganizmi - soj mikroorganizma koji ima mehanizme otpornosti na ovaj lijek. Njegov rast na hranjivoj podlozi prestaje tek kada se koriste vrlo visoke koncentracije lijeka, koje se zbog visoke toksičnosti ne mogu stvoriti u organizmu. U liječenju infekcija uzrokovanih ovim mikroorganizmom, klinički učinak iz terapije izostaje čak i kod primjene najveće doze antibiotika. U isto vrijeme, može biti nuspojave antibiotik.

Indikacije za određivanje osjetljivosti mikroorganizama na antibiotike:

1) određivanje osjetljivosti na novi antibiotik preporučen za uporabu;

2) periodično praćenje rezistencije na antibiotike u odabranim zdravstvenim centrima iu različitim zemljopisnim regijama radi praćenja širenja rezistencije na antibiotike;

3) obrazloženje adekvatne antibiotske terapije kod pojedinih bolesnika u sljedećim slučajevima:

a) izolacija mikroorganizama iz prvenstveno sterilnih tekućina, ljudskih organa i tkiva;

b) kod izolacije mikroorganizama iz primarno nesterilnih biotopa, procjeni osjetljivosti treba prethoditi procjena kliničke važnosti izoliranog mikroorganizma;

c) infekcije rezistentne na lijekove empirijske terapije;

d) jedinstvene infekcije i nedostatak iskustva u njihovoj terapiji;

e) infekcije koje zahtijevaju produljenu terapiju (svaki tjedan terapije utvrđuje se rezistencija na antibiotike, jer je moguća promjena uzročnika).

Određivanje osjetljivosti mikroorganizama na antibiotike je nepraktično:

1) za predstavnike normalne ljudske mikroflore, kada su izolirani iz prirodnih staništa;

2) za vrste mikroorganizama kod kojih nisu opisani rezistentni oblici na pojedine antibiotike. Na primjer, Streptococcus pyogenes osjetljiv je na penicilin, pa je u svakodnevnoj praksi nepraktično provoditi test osjetljivosti na te lijekove.

7. Bit pojmova minimalne inhibitorne (supresivne) koncentracije i minimalne baktericidne koncentracije.

Minimalna inhibitorna koncentracija (MIC)– minimalna koncentracija kemoterapeutske ili antiseptičke tvari koja uzrokuje Potpuno potiskivanje vidljivo golim okom Rast ovog mikroorganizma na podlozi pod standardnim eksperimentalnim uvjetima.

Mjeri se u µg/ml ili jedinicama. radnje. Utvrđuje se sjetvom testne kulture na čvrste ili tekuće podloge koje sadrže različite koncentracije lijeka.

Minimalna baktericidna koncentracija (MBC)- minimalna koncentracija kemoterapeutika ili antiseptika koja uzrokuje Potpuna destrukcija bakterija u standardnim eksperimentalnim uvjetima.

Mjeri se u µg/ml ili jedinicama. radnje. Utvrđuje se sjetvom pokusne kulture na čvrste ili tekuće hranjive podloge koje sadrže različite koncentracije lijeka. Za razlikovanje od MIC iz sterilnih zona ili prozirnih epruveta, inokulacija se vrši na podlozi bez lijeka (pojava rasta ukazuje na statički učinak, odsutnost ukazuje na cidni učinak).

MBC i MIC koriste se u kemoterapiji i antisepticima za odabir učinkovitih lijekova i doza za određenog pacijenta.

8. Bit pojmova osjetljivosti i rezistencije uzročnika, postantibiotski učinak.

Osjetljivost ekscitera- nedostatak mehanizama otpornosti na kolesterol; dok se razmnožavanje uzročnika suzbija prosječnom terapijskom dozom koja 2-4 puta premašuje minimalnu inhibitornu koncentraciju.

Otpornost na patogene- prisutnost mehanizama otpornosti na kolesterol; rast uzročnika nije potisnut koncentracijom lijeka, koji ima toksični učinak in vivo.

Post-antibiotski učinak- trajna inhibicija vitalne aktivnosti bakterija nakon njihovog kratkotrajnog kontakta s antibakterijskim lijekom.

9. Odrednice selektivne toksičnosti kemoterapijskih sredstava.

1) kolesterol se nakuplja u mikrobnim stanicama u koncentracijama višestruko većim nego u stanicama sisavaca

2) CS djeluju na strukture koje su prisutne samo u mikrobnoj stanici (stanična stijenka, DNA giraza tipa II), a nema ih u stanici sisavaca

3) CS djeluju na biokemijske procese koji se odvijaju isključivo u mikrobnim stanicama, a nema ih u stanicama sisavaca.

10. Suština razlike između farmakodinamičkih i kemoterapijskih svojstava.

1. Farmakodinamička terapija djeluje na razini arhitekture funkcionalnih sustava, njezini su učinci obično reverzibilni. Za kemoterapiju su najvrjednija sredstva s najvećim ireverzibilnim djelovanjem.

2. Farmakodinamski agensi izazivaju postupan odgovor tjelesnog sustava, za kemoterapijske agense najpoželjniji učinci su „sve ili ništa“.

3. Kemoterapija ima etiotropnu strategiju usmjerenu na uništavanje uzročnika ili transformiranih stanica organizma, a farmakodinamička terapija može biti etiotropna i patogenetska.

11. Osnovni principi racionalne kemoterapije.

1. Uzročnik mora biti osjetljiv na AB

Pravilo "najbolje ponude" - referentne tablice, uzimajući u obzir regionalne karakteristike populacije antibakterijske osjetljivosti.

2. AB treba stvoriti terapeutsku koncentraciju u žarištu.

3. Uglavnom adekvatan režim doziranja, ovisno o:

ü uzročnik

dinamika kliničkog tijeka infekcije

lokalizacija infekcije

ü trajanje i priroda tijeka infekcije (akutna, kronična ili bakterionositeljstvo)

4. Optimalno trajanje antimikrobne kemoterapije (primjer: streptokokni faringitis izlječiv je za 10 dana, akutni nekomplicirani gonokokni uretritis za 1-3 dana, akutni nekomplicirani cistitis za 3 dana).

Kako bi se spriječile nuspojave, razvoj superinfekcije ili otpornosti, trajanje liječenja treba odgovarati razdoblju iskorjenjivanja patogena.

5. Uzimanje u obzir faktora pacijenata:

Alergijska povijest, imunokompetentnost

funkcija jetre i bubrega

ü podnošljivost AB kada se uzima oralno; usklađenost

ozbiljnost stanja

ü dob, spol, trudnoća ili dojenje, oralna kontracepcija

ü nuspojave

6. Kombinirana antibiotska terapija.